Study on the effect of P16 and Ki-67 in the pathological diagnosis of cervical lesions

Zhang Minghui Zhang, Liang Xue, Wang Jing^{, corresponding author}

Ningxia Medical University General Hospital, Ningxia Yinchuan 750000

[Abstract]: Objective: To carry out immunohistochemical detection of P16 and Ki-67 in the pathological diagnosis of cervical lesions and analyze their detection effect. Methods: Retrospective analysis of Ningxia medical university general hospital during June 2022 to December 2022, in pathology patients diagnosed with 80 cases as the study group, randomly selected during the period to our hospital health examination patients with 80 cases as a control group, experimental group and control group P16 and Ki-67 immunohistochemical detection, comparative analysis of the detection effect of the two groups. Results: The P16 and Ki-67 were significantly higher than the control group, and the difference was statistically significant (P <0.05). In terms of the positive expression rate of P16, the study group was significantly higher than that of CIN grade I, CIN II, CIN III and cervical squamous cell carcinoma, with a statistically significant difference (P <O.05). In terms of the positive expression rate of Ki-67, the study group had a significantly higher positive rate of CIN I, CIN II, CIN III and cervical squamous cell carcinoma, with a statistically significant difference (P <O.05). Conclusion: Immunohistochemical detection of P16 and Ki-67 has important clinical applications in the pathological diagnosis of cervical lesions, which can improve the accuracy of CIN classification and be used as an early screening method for cervical cancer precancerous.

[Key words]: cervical lesions; pathological diagnosis; P16; Ki-67; immunohistochemical detection

宫颈癌是全球女性中排名第四的常见恶性肿瘤，每年约有60万的新发病例和30万左右的死亡病例^[1]。其发病原因多为高危型人乳头瘤病毒，导致宫颈鳞状上 皮异常增生，往往疾病的早期尚无特异性的临床表现，不易于发现^[2]。宫颈癌通常是由于宫颈上皮内病变（CIN）未经治疗或未得到规范治疗而发展而来。宫颈上皮内病变（CIN）是一种癌前病变，可发展为宫颈癌。临床将CIN分为三级：CINⅠ级表示宫颈轻度异型性病变，CINⅡ级表示宫颈中度异型性病变，CIN Ⅲ级表示宫颈重度异型性病变^[3]。随着级别的升高，病变越来越接近宫颈癌。大部分的CIN Ⅰ级会自然消退，不会进展为宫颈癌。CIN Ⅱ级和部分CIN Ⅲ级可能发展为宫颈癌，需要更进一步的诊断和治疗。

在宫颈癌的诊断中，P16和Ki-67是近些年应用较为广泛的肿瘤标记物，效果显著，还能够对CIN的性质判断上有辅助作用，便于宫颈癌的早期筛查。本文研究展开不同宫颈组织P16和Ki-67的免疫组化检测，并分析这两种检测指标的检测效果。

1资料与方法

1.1一般资料

回顾性分析宁夏医科大学总医院2022年6月至2022年12月期间，于病理科所诊断的宫颈病变患者中随机抽取80例作为此研究的研究组，随机选取同期间来本院做健康体检的患者80例作为对照组，实验组与对照组同时开展P16与Ki-67免疫组化检测，其中，研究组患者年龄范围28—67岁，平均年龄（49.48±18.26）岁；病理诊断结果显示，有55例患者为慢性炎，8例为CIN I级，6例为CIN II级，7例为CIN III级，4例为宫颈鳞状细胞癌。对照组患者年龄范围27—65岁，平均年龄（48．59±18.31）岁。两组患者的年龄等各项临床基线资料，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1组织前处理：将采取宫颈活检组织固定于足量的10%中性缓存福尔马林固定液之中，经脱水、透明、浸蜡后进行石蜡包埋处理，将包埋好的病理蜡块保存备用。

1.2.2免疫组化检测方法：石蜡切片3-4㎛，65℃恒温箱内烤片过夜，切片常规脱蜡、水化，蒸馏水冲洗，Tris-EDTA抗原修复液（PH9.0）高压热修复3min，流水冲洗冷却，3%过氧化氢水溶液处理10min（消除内源性过氧化物酶），PBS溶液浸泡6min，PBS溶液冲洗3次，甩干，加一抗试剂Ki-67（ZM-0166,UMAB107）、P16（ZM-0406,UMAB4）（试剂均来自北京中杉金桥生物技术有限公司），37℃恒温箱孵育60min，PBS溶液冲洗3次，甩干，加入二抗（PV6000D，北京中杉金桥生物技术有限公司），室温孵育30min，PBS溶液冲洗3次，甩干，DAB显色8min，流水冲洗，苏木素复染1min，水洗，1%盐酸酒精数秒，水洗，PBS反蓝，水洗，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。同时，用PBS缓冲液替代一抗，作阴性对照，进行P16和Ki-67的检测。显微镜下观察染色结果。

1.3观察指标

对两组患者的宫颈病变病理诊断结果进行对比分析，其中包括两项内容：（1）P16表达率和Ki-67阳性表达率，阳性的判断方式为观察细胞核与细胞浆中是否有棕黄色颗粒物，若有则为阳性，其中P16的阳性占比在5%以上，而Ki-67主要表达在上皮细胞中；（2）对比分析在慢性炎、CIN I级、CIN II级、CIN III级以及宫颈鳞状细胞癌这五项内容下P16和Ki-67的阳性表达情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS23.0软件进行分析，组间比较采用t检验、卡方检验，P≤0.05，差别具有统计学意义。
2结果

2.1对照组和研究组P16表达率和Ki-67阳性表达率比较

对两组患者的宫颈病变病理诊断结果进行对比分析，结果显示研究组患者的P16表达率和Ki-67阳性表达率明显高于对照组患者的相应数据，差异具有统计学意义（P<0.05）。

具体如表1所示。

表1 两组患者P16表达率和Ki-67阳性表达率对比情况 （n,%）

2.2不同病变程度下的P16表达对比情况

在P16的阳性表达率方面，研究组在CIN I级、CIN II级、CIN III级以及宫颈鳞状细胞癌的阳性率上明显高于慢性炎，差异有统计学意义（P＜O.05）。在Ki-67的阳性表达率方面，研究组在CIN I级、CIN II级、CIN III级以及宫颈鳞状细胞癌的阳性率上明显高于慢性炎，差异有统计学意义（P＜O.05）。见表2。

表2 不同病变程度下的P16表达对比情况 （n,%）

注：CIN I级与慢性炎相比，t=157.653，CIN II级与慢性炎相比，t=199.943，CIN III级与慢性炎相比，t=201.028，宫颈鳞状细胞癌与慢性炎相比，t=199.943。P＜O.05。

3讨论

宫颈癌的早期筛查对于预防和治疗宫颈癌具有重要意义，能够早期发现宫颈癌前病变，防止其发展为宫颈癌。对于已经患有宫颈癌的患者，通过筛查可以更早地发现，从而进行早期治疗，使得治疗效果更佳，生存率更高。

P16基因是一种重要的抗病毒抗癌基因，其产物可以促进细胞增殖，是细胞周期中的重要调节因子。在正常情况下，人体细胞有序地生长和分裂，但当细胞受到致癌因子的作用时，其生长与分裂的调节机制发生紊乱，就会导致异常增殖，引发癌症^[4]。P16基因通过调节细胞增殖过程中的关键酶活性，抑制细胞过度增殖，从而发挥抗肿瘤的作用。研究发现宫颈癌和 CIN 中 P16 的高表达与 HPV 感染有关^[5]，可将 P16 作为宫颈癌癌前筛查的指标。P16免疫组化检测通过抗原抗体结合的反应，判断组织中是否有P16阳性的情况。如果存在P16阳性，则可能提示患者存在宫颈上皮内瘤变或者宫颈癌等疾病。

Ki-67是一种细胞核内的蛋白质，通常被用作癌症组织的免疫组化检测指标。在对肿瘤组织进行免疫组化检测时，通过标记Ki-67蛋白，可以观察到肿瘤细胞中的Ki-67表达水平，从而判断肿瘤的恶性程度。一般情况下，良性肿瘤的Ki-67数值在5%-10%之间，而恶性肿瘤的Ki-67数值通常大于10%。数值越高，表明肿瘤细胞的增殖能力越强，肿瘤的恶性程度也越高^[6]。这种检测方法可以帮助医生判断肿瘤的性质和恶性程度，为后续的治疗提供依据。

本次研究中，研究组患者的P16表达率和Ki-67阳性表达率明显高于对照组患者的相应数据，差异具有统计学意义（P<0.05）。在P16阳性表达率方面，研究组患者在CIN I级、CIN II级、CIN III级以及宫颈鳞状细胞癌这四项内容的阳性率上，与慢性炎这一项内容的对比上，都提升较为显著，差异有统计学意义（P＜O.05）。在Ki-67的阳性表达率方面，研究组患者在CIN I级、CIN II级、CIN III级以及宫颈鳞状细胞癌这四项内容的阳性率上，与慢性炎这一项内容的对比上，都提升较为显著，差异有统计学意义（P＜O.05）。

综上所述，免疫组化检测 P16 和 Ki-67在宫颈病变的病理诊断中有着重要的临床应用价值，可提升CIN分级的准确性，可作为宫颈癌癌前病变的早期筛查手段。

参考文献

[1] 史帅.对宫颈病变病理诊断中P16与Ki-67免疫组化检测的应用价值进行分析[J].东方药膳 2021年24期, 75页, 2022.

[2]王艳丽,宋明芮.宫颈病变病理诊断中P16与Ki-67免疫组化检测的效果研究[J].实用妇科内分泌电子杂志,2021,8(15):128-130.DOI:10.16484/j.cnki.issn2095-8803.2021.15.008.

[3] 付路瑶,王飞.宫颈病变病理诊断中P16与Ki-67免疫组化检测的应用[J].健康必读, 2020, 000(003):56,55.

[4] 刘彤,崔莉,许丽娟,等.p16,Ki-67蛋白表达及HPV检测在宫颈上皮内瘤变中的诊断意义[J].诊断病理学杂志, 2009(5):3.DOI:CNKI:SUN:ZDBL.0.2009-05-009.

[5] Bragana JF，Sarian LO，Pitta DＲ，et al． Expression of p16INK4a and cervical infection with high-risk human papillomavirus are not related to p53 activity in cervical intraepithelial neoplasia［J］． International Journal of Gynecological Cancer，2007，18( 5) : 1060．

[6] 王维俊.宫颈癌前病变中分子生物学标记物P16,Ki-67及CK7的表达及临床意义[D]. 2018.